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作者:闵
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% n3 \& Q+ ~! V% f$ O, i. ^首先,从规范角度出发:目前认可的,取得注册证的PD-L1表达检测技术就是IHC免疫组化技术,获批的有DAKO公司的22c3、28-8试剂盒、罗氏的SP142,SP263试剂盒等等,暂时未有血液PD-L1检测获得批准。
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第二,从检测理论出发:目前各临床实验亚组分类的时候,采用的指标均为PD-L1表达(即PD-L1蛋白表达),而蛋白表达临床检测中最常用的检测技术即为IHC免疫组化技术,检测基本原理是通过试剂盒中相应的抗体与目标蛋白,即肿瘤细胞中的PD-L1蛋白结合,随后即可在显微镜下显色,这并不是最终目的,PD-L1表达检测的最后一步,是要统计计算切片下所有肿瘤细胞中被染色(即携带有PD-L1表达)的肿瘤细胞占比,由此得到的百分数,即为PD-L1表达分数(0%-100%)。: W4 C" q0 i) M
红圈所示,即为病人标本中携带有PD-L1表达的肿瘤细胞(该病人PD-L1表达5%) . E) V" Z6 _. }( k5 I8 ~
因此,要满足免疫组化的检测条件,首先就得保证足够的细胞,至少要有100个肿瘤细胞,组织标本大多数能够满足,血液标本中细胞含量远低于组织,较难达标;第二点要求,即免疫组化染色时需要目标细胞固定,方便后续将多余试剂洗脱,组织标本因为都是进过福尔马林、乙醇以及石蜡固定,所以细胞位置固定,不易脱落;而血液即便滴在载玻片上,用盖玻片压住,也容易发生流动,无法进行染色及洗脱操作,更无法进行后续统计步骤。7 g1 {8 z# d" a. ?5 @+ S
) R% D z9 f: E4 }. ^ y# q2 ?第三,从检测技术上出发:有些检测公司会混淆视听,声称自己采用PCR法解决了血检PD-L1的难题,可以代替组织检测,这种说法没有规范上认可,也存在原理上的差异。
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! A' \9 q! H e+ z4 v% ]首先PCR技术是对基因或者更确切说对DNA、RNA的检测,通过对目标DNA/RNA不停的复制扩增,达到指数倍放大信号的目的,某个基因想要最终发挥功能,需遵循中心法则,以DNA为起点,转录生成RNA,再翻译组装形成蛋白质,成为蛋白质之后,才能在细胞活动中发挥功能,如PD-L1蛋白则是有PD-L1基因从DNA转录成RNA,再翻译组装最终形成相应蛋白。
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从上图可以看到,从DNA到蛋白质,需要经历转录、翻译两个步骤,而这两个步骤又受到细胞内各个信号通路的调控,随时可能增量或者减量,也就是说,DNA的数量并不直接与实际蛋白表达量等同,有可能DNA量很多,但是由于调控,导致转录翻译形成的蛋白量并不多。
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- @1 ~- v' r d$ _总结
5 ]$ E" s: U; r9 ]1 }目前市场上存在号称可以用血液检测PD-L1表达的基因检测公司,这些检测多数采用PCR技术用血检测PD-L1表达且只标注基因表达,连测的是DNA还是RNA都不明确,而作为结果的Ct值*也不直接等同于DNA或RNA表达量。根据中心法则以及既往相关研究,血液PD-L1 mRNA表达与组织PD-L1表达并无显著相关性,也就是说市面上这种所谓血液PD-L1表达的结果根本没有参考价值。2 E+ T2 s; U9 W7 h9 P; S: K* a
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简单讲,Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时,所对应的循环数。
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3 Z+ P; \9 P; K+ ~6 P, b1 P, P无论从技术规范、检测理论还是检测技术上来说,目前市场上存在的所谓血检PD-L1技术,不是领先反而只是忽悠,对病人没有一点帮助,谨记。+ b( b( X7 G9 G; G. U9 x7 m
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